【技术业务】精准检验精准治疗

文 / 内蒙古自治区肿瘤医院

2018-09-12 21:11

内蒙古自治区肿瘤医院检验科PCR实验室自2015年10月成立并通过认证以来，一直致力于肿瘤的分子检验，指导临床靶向用药，为患者的个体化治疗提供依据，使其从中获益。其中，主要针对肺癌患者的EGFR基因突变检测和针对结直肠癌患者的KRAS基因突变检测在全国卫生部临床检验质量控制中均获满分成绩！目前循环肿瘤DNA（ctDNA）提取技术在EGFR基因检测中的应用优势日渐突显，其克服了晚期肺癌患者组织样本获取困难的劣势，只需抽取患者外周血10ml即可达到检测目的，使基因检测迈向了一个新的台阶。 当前两项检测均已纳入内蒙古甲类医保目录。

样本要求

1、检测所用样本类型为石蜡包埋病理组织或切片。 2、样本中癌细胞的含量应不低于整个样本的30%。含较大组织的蜡块建议切取10um厚的切片3～5片，较小或穿刺组织则为10片。 3、EGFR ctDNA：用5ml EDTA抗凝管采集患者2管血液直接送检。 4、EGFR 胸水样本：引流胸水50ml。 温馨提示：若组织未封片，可送检等量切好的蜡卷，无需特意制白片。

检测原理

采用ARMS-PNA技术，结合荧光PCR平台，检测人类EGFR基因上的29种不同突变，KRAS基因上12种突变。

PNA又叫肽核酸，是一种比DNA特异性更强的探针，它的Tm值很高，在退火时先和野生型DNA模板结合，能阻断大部分野生型DNA片段的扩增。ARMS技术则是利用PCR引物的3’端具有高特异性，如果引物的3’端和模板不匹配，则难以进行延伸。在引物设计的时候，将引物的3’端设计的与野生型片段不匹配，和突变型片段匹配，从而专一的扩增突变型DNA片段。两种方法结合最低可以检测到10ng基因背景下突变含量为1%的DNA样本。

这是实验中的外控基因检测体系，用于评估待测DNA的质量，同时还用于判定检测结果的阴阳性，从而排除因DNA浓度过低导致的假阴性检测结果，或因DNA浓度过高而导致的假阳性检测结果。