miR-335-5p靶向程序化细胞死亡基因5对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响

程序化细胞死亡基因5(programmed cell death 5，PDCD5)：是1999年从人白血病细胞系克隆的一种凋亡相关基因，表达凋亡蛋白，在人多种肿瘤中表达下调，具有复杂的生物学功能，包括程序性细胞死亡和免疫调节，在不同刺激下能加速不同类型细胞的凋亡，在凋亡过程中，PDCD5迅速从细胞质转移到细胞核；其异常表达与癌症、自身免疫性疾病和炎症过程有关。

双荧光素酶报告基因：是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统，通过共转染的“对照”作为内参为实验提供一基准线，从而可以在最大程度上减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，使得数据结果更为可信，是用于检测基因之间靶向关系的一种常用方法。

关节间隙狭窄：骨关节炎患者因病情时间长，关节软骨面长期磨损而变薄、塌陷，以及继发的膝关节周围软骨组织挛缩导致的膝关节间隙变窄。

背景：研究发现，miR-335-5p在骨关节炎患者关节液中表达下调，其可能与骨关节炎的发生发展有关。

目的：探讨miR-335-5p对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制。

方法：分离培养人原代关节软骨细胞，以10 μg/L白细胞介素1β处理软骨细胞建立骨关节炎模型，并对处理后的软骨细胞进行转染和分组：对照组(常规培养基)、白细胞介素1β组、miR-NC组、miR-335-5p组、si-NC组、si-PDCD5组、miR-335-5p+pcDNA3.1组、miR-335-5p+pcDNA3.1-PDCD5组。培养至24，48和72 h采用MTT法和流式细胞术分别检测软骨细胞增殖和凋亡率；qRT-PCR检测软骨细胞miR-335-5p、程序化细胞死亡基因5(programmed cell death 5，PDCD5)、软骨蛋白聚糖抗体(ADAMTS-5)和基质金属蛋白酶13 mRNA的表达；Western blot实验检测软骨细胞中PDCD5、Cyclin D1、p21、Bax和Bcl-2蛋白的表达，双荧光素酶报告系统验证miR-335-5p与PDCD5的调控关系。研究方案的实施符合长沙市第一医院的相关伦理要求。

结果与结论：①与对照相比，白细胞介素1β可抑制软骨细胞增殖并促进细胞凋亡，抑制软骨细胞中miR-335-5p的表达；过表达miR-335-5p可促进白细胞介素1β作用的软骨细胞增殖和抑制细胞凋亡；②miR-335-5p靶向负调控PDCD5的表达；③抑制PDCD5可促进白细胞介素1β作用的软骨细胞增殖并抑制细胞凋亡；过表达PDCD5可逆转上调miR-335-5p对白细胞介素1β作用的软骨细胞增殖和凋亡的作用；④结果说明，miR-335-5p通过靶向PDCD5促进细胞增殖和抑制细胞凋亡；miR-335-5p是骨关节炎潜在分子靶点。

https://orcid.org/0000-0002-5882-3267 (张云青)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 骨关节炎, 软骨细胞, miR-335-5p, PDCD5, 增殖, 凋亡

引用本文：张云青, 王 健, 阳春华, 李 聪. miR-335-5p靶向程序化细胞死亡基因5对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(14): 2142-2147.

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