保健品辅助降血糖功能检验方法-飞凡检测认证解析

文 / 女性健康咨讯
2021-03-15 10:09

1.动物实验

1.1实验动物

选择成年动物,小鼠(262g)或大鼠(18020g),单性,每组8-12只老鼠,每组10-15只老鼠。

1.2材料

1.2.1试剂

Alloxan(C4H2N2O4·H2O,分子量160.08)或链脲佐菌素,地塞米松磷酸钠注射液,葡萄糖或医用淀粉,血糖试纸或试剂盒,胰岛素,甘油三酸酯,总胆固醇测定试剂盒

1.2.2高热量饲料

猪油10%,蔗糖15%,蛋黄粉15%,酪蛋白5%,胆固醇1.2%,胆酸钠0.2%,碳酸氢钙0.6%,石粉0.4%,大鼠维持饲料52.6%

1.2.3仪器

血糖仪,自动生化仪,可见光分光光度计,酶标仪,天平。

1.3剂量分组和测试样品的给药时间

该实验具有三个剂量组和一个模型对照组。其中一个剂量组是人体推荐量的10倍(小鼠)或5倍(大鼠),并设置了两个剂量组。高剂量通常不超过30。如有必要,设立一个空白对照组。同时,给正常动物组高剂量的测试样品。测试样品的使用期限为30天,如有必要,可以延长至45天。

1.4实验方法

1.4.1正常动物的降血糖实验

根据空腹血糖水平3-5小时将健康的成年动物分为几组,并随机选择一个对照组和一个剂量组。对照组给予溶剂,剂量组给予高剂量浓度的测试样品。连续30天测量空腹血糖值(空腹与实验前相同),并比较两组动物的血糖值。

1.4.2高血糖模型降血糖实验

选项一

1.4.2.1胰岛损伤和高血糖模型

1.4.2.1.1飞凡检测认证提示原理

四氧嘧啶(或链脲佐菌素)是一种细胞毒性剂,可以选择性损害多种动物的胰岛细胞,从而导致胰岛素分泌减少和实验性糖尿病。

1.4.2.1.2建模方法

购买成年动物,适应1天后,随机选择15只动物禁食3-5小时,并测量空腹血糖作为该批动物的基础血糖值。然后将动物禁食24小时(免费喝水),注射四氧嘧啶(使用前新鲜配制)以建立模型,小鼠为45-50mg / kg BW.iv或125-130mg / kg BW.ip,大鼠为50-80mg / kg BW.iv或120-160mg / kgBW.ip。 5-7天后,将动物禁食3-5小时,然后测量血糖。血糖值为10-25mmol / L,是成功的高血糖动物模型。

1.4.2.1.3降血糖模型动物降血糖实验

根据空腹血糖水平3-5小时,将高血糖模型动物分为组,随机选择1只模型对照组和3个剂量组(组间差异不超过1.1mmol / L)。剂量组给予不同浓度的测试样品,模型对照组给予溶剂。连续30天测量空腹血糖值(空腹与实验前相同),并比较每组的血糖值和血糖下降百分比。

(实验前血糖水平-实验后血糖水平)

血糖下降率%= ×100%

实验前血糖水平

1.4.2.1.4高血糖模型动物的葡萄糖耐量试验

测试样品的剂量分组和给药时间与1.4.2相同。将每组动物禁食3-5小时,并在给予葡萄糖或药用淀粉之前(即0小时)测量血糖水平。剂量组给予不同浓度的测试样品,模型对照组给予相同体积的溶剂。 15-20分钟后,每组口服2.0g / kg体重的葡萄糖或3-5g / kg体重的医用淀粉,并在给药后0.5和2小时或1、2分别测量每组的血糖值医用淀粉给药后数小时。观察模型对照组并在给予葡萄糖或医用淀粉后的每个时间点(0、0.5、2小时)血糖值和血糖曲线下面积的变化。

(0小时血糖+ 0.5小时血糖)×0.5(2小时血糖+ 0.5小时血糖)×1.5

血糖曲线下的面积= + +

二十二

方案二

1.4.2.2胰岛素抵抗性葡萄糖/脂质代谢障碍模型(选择一种)

1.4.2.2.1地塞米松诱导的胰岛素抵抗性葡萄糖/脂质代谢障碍模型

1.4.2.2.1.1飞凡检测认证提示原理

糖皮质激素可拮抗胰岛素的生物学作用,抑制靶组织对葡萄糖的吸收和利用,并促进蛋白质面筋和脂肪的分解和糖异生可导致葡萄糖和脂质代谢紊乱,胰岛素抵抗并诱发实验性糖尿病。

1.4.2.2.1.2试验方法

购买健康的雄性大鼠(15020g),并使用常见的维持材料3-5天,禁食3-4小时,抽尾血,测量血糖水平,然后空腹给予葡萄糖(0小时),并给予2.5 g / kgBW葡萄糖之后,将0.5和2小时的血糖值测量为该批动物的基本值。将0和0.5小时的血糖水平分为5组,分别为空白对照组,1个模型对照组和3个剂量组,每组15只。空白对照组不予治疗。 3个剂量组分别通过管饲法给予不同浓度的测试样品,而模型对照组连续35天给予相同体积的溶剂。每组饲喂维持饲料。 1周后,用高热量饲料代替模型对照组和3个剂量组。喂养2周后,以高热量喂养为基础,向模型对照组和3个剂量组给予地塞米松0.8 mg。 / kgBW腹膜内注射(0.008%地塞米松注射量1ml / 100g体重),每天一次,持续10-12天。实验结束时,每组动物禁食3-4小时,并测量禁食血糖,葡萄糖耐量,血清胰岛素,胆固醇和甘油三酸酯水平。

1.4.2.2.1.3观察指标

1.4.2.2.1.3.1空腹血糖,葡萄糖耐量

将每组的动物禁食3-4小时,并测量禁食血糖,即给予葡萄糖之前的血糖值(0小时)。剂量组给予不同浓度的测试样品,模型对照组给予相同体积的溶剂,空白对照组不予处理。 -20分钟后,每组口服给予2.5g / kg体重的葡萄糖,并在给予葡萄糖后0.5和2小时测量每组的血糖值。如果模型对照组的0.5小时血糖值≥10mmol/ L,或模型对照组为0.5小时,则在2小时的任何时间血糖升高或血糖曲线下的面积升高。与空白对照组相比,差异有统计学意义。确定建立了模型葡萄糖代谢紊乱。在此基础上,观察模型对照组和测试样品组的空腹血糖,葡萄糖给药后(0.5、2小时)的血糖变化以及血糖曲线下面积分别在0、0.5和2小时的变化。

(实验前血糖水平-实验后血糖水平)

血糖下降率%= ×100%

实验前血糖水平

(0小时血糖+ 0.5小时血糖)×0.5(2小时血糖+ 0.5小时血糖)×1.5

血糖曲线下的面积= + +

二十二

1.4.2.2.1.3.2胆固醇,甘油三酸酯

每组的动物禁食3-4小时,并测量血清胆固醇和甘油三酸酯。如果模型对照组的血清胆固醇或甘油三酯显着升高,则与空白对照组相比,差异显着,并且确定模型脂质代谢障碍得以建立。在此基础上,观察模型对照组和试样组的血脂变化。

1.4.2.2.1.3.3胰岛素

每组的动物禁食3-4小时,并测试血清胰岛素。与空白对照组相比,模型对照组的胰岛素抵抗指数没有明显降低,并且建立了动物葡萄糖/脂质代谢紊乱。判断胰岛素抵抗性葡萄糖/脂质代谢障碍模型是成功的。观察模型对照组和测试样品组的胰岛素抵抗。

血糖×胰岛素

胰岛素抵抗指数=胰岛素/22.5e-㏑血糖≈

22.5

1.4.2.2.2四氧嘧啶诱发的胰岛素抵抗性葡萄糖/脂质代谢障碍模型

1.4.2.2.2.1飞凡检测认证提示原理

在高热量饲料的基础上,补充少量的四氧嘧啶(C4H2N2O4·H2O,分子量160.08),会导致葡萄糖/脂质代谢紊乱,胰岛素抵抗,并诱发实验性糖尿病。

1.4.2.2.2.2建模方法

购买健康的雄性大鼠(15020g),并采用正常的维持饲料3-5天,禁食3-4小时,采集尾巴血,在给予葡萄糖之前(即0小时)和给予2.5后测量血糖水平g / kgBW葡萄糖0.5和2小时的血糖值用作这批动物的基本值。分为血糖水平为0和0.5小时的5组,即1个空白对照组,1个模型对照组和3个剂量数量组,每组15个。空白对照组未接受治疗。 3个剂量组分别通过管饲法给予不同浓度的测试样品,而模型对照组连续33天给予相同体积的溶剂。每组饲喂维持饲料。 1周后,用高热量饲料代替模型对照组和3个剂量组。喂养3周后,模型对照组和3剂禁食24小时(禁水),并给予阿洛生103 -105mg / kg体重的腹腔注射,注射量为1ml / 100g体重。注射后,继续给予高热量饲料3-5天。实验结束时,每组动物禁食3-4小时,并测量禁食血糖,葡萄糖耐量,血清胰岛素,胆固醇和甘油三酸酯水平。

1.4.2.2.2.3观察指标

1.4.2.2.2.3.1空腹血糖,葡萄糖耐量

将每组的动物禁食3-4小时,并测量禁食血糖,即给予葡萄糖之前的血糖值(0小时)。剂量组给予不同浓度的测试样品,模型对照组给予相同体积的溶剂,空白对照组不予处理。 -20分钟后,每组口服给予2.5g / kg体重的葡萄糖,并在给予葡萄糖后0.5和2小时测量每组的血糖值。如果模型对照组的0.5小时血糖值≥10mmol/ L,或模型对照组为0.5小时,则在2小时的任何时间血糖升高或血糖曲线下的面积升高。与空白对照组相比,差异有统计学意义。确定建立了模型葡萄糖代谢紊乱。在此基础上,观察模型对照组和测试样品组的空腹血糖,给予葡萄糖后(0.5、2小时)的血糖变化以及血糖曲线下面积在0、0.5和2小时的变化。

(实验前血糖水平-实验后血糖水平)

血糖下降率%= ×100%

实验前血糖水平

(0小时血糖+ 0.5小时血糖)×0.5(2小时血糖+ 0.5小时血糖)×1.5

血糖曲线下的面积= + +

二十二

1.4.2.2.2.3.2胆固醇,甘油三酸酯

每组动物禁食3-4小时,并进行血液检查清除胆固醇和甘油三酸酯。如果模型对照组的血清胆固醇或甘油三酯显着增加,则与空白对照组相比,差异是显着的。确定建立了模型脂质代谢紊乱。在此基础上,观察模型对照组和接受者。测试样品组中血脂的变化。

1.4.2.2.2.3.3胰岛素

每组的动物禁食3-4小时,并测量血清胰岛素。与空白对照组相比,模型对照组的胰岛素抵抗指数没有明显降低,并且建立了动物葡萄糖/脂质代谢紊乱。判断胰岛素抵抗性葡萄糖/脂质代谢障碍模型是成功的。观察模型对照组和测试样品组的胰岛素抵抗。

血糖×胰岛素

胰岛素抵抗指数=胰岛素/22.5e-㏑血糖≈

22.5

保健品辅助降血糖功能检验方法-飞凡检测认证解析

1.5数据处理与结果判断

通常,使用方差分析,但是有必要首先根据方差分析的过程来测试方差的均匀性。如果方差均匀,则计算F值,F值1.5.1指标判断

1.5.1.1正常动物的降血糖测试

血糖指数:空腹血糖测试样品剂量组与对照组相比在统计学上没有显着差异,并且可以判断它对正常动物的血糖没有影响。

1.5.1.2降血糖模型降血糖测试

空腹血糖指数:在建立模型的前提下,与模型对照组相比,测试样品剂量组的空腹血糖降低或血糖降低百分比增加具有统计学意义,而空腹血糖测试样品的指数结果确定为阳性。

葡萄糖耐量指数:在建立模型的前提下,将测试样品剂量组与模型对照组进行比较。血糖或医用淀粉显着水平后0.5或2小时,血糖在统计学上显着下降(或血糖下降百分比增加),或血糖曲线下面积分别为0、0.5和2小时减少有意义的是,确定测试样品的葡萄糖耐量指数结果为阳性。

血脂指数:在建立模型的前提下,被测样品剂量组与模型对照组相比,血清胆固醇或甘油三酯统计下降,可以判断为降低血脂指数阳性。